昆虫病毒研究的回顾与展望

在病毒学研究一个多世纪的发展史中,以昆虫作为宿主,并在宿主种群中发生流行病的昆虫病毒研究起步较迟,落后于植物病毒、动物病毒、细菌病毒.但是近五十年来,昆虫病毒研究得到很大的发展.据国际病毒分类委员会第七次报告的统计,至今已报告的昆虫病毒有1600多种,涉及昆虫纲几乎所有的目.这些昆虫病毒分属于13个病毒科、2个病毒亚科和21个病毒属.按病毒核酸类型划分,可分为:1)双链DNA病毒,其中有杆状病毒科、痘病毒科、多分病毒科、泡囊病毒科和虹彩病毒科;2)单链DNA病毒中的细小病毒科;3)双链RNA病毒,其中有呼肠孤病毒科、二分RNA病毒科;4)单链RNA病毒,其中有微RNA病毒科、野田村病毒科和T四病毒科;5)DNA和RNA的反转录病毒,包括前病毒科和变位病毒科[2].昆虫病毒已经成为病毒研究比较活跃的领域之一,它在生命科学研究中占有显著的地位并显示出广阔的发展前景.我国的昆虫病毒研究实际上始于二十世纪50年代中期高尚荫、曹诒荪等人对家蚕核型多角体病毒(NPV)病研究[3].近五十年来,在昆虫病毒--昆虫细胞离体培养系统;昆虫病毒资源的识别鉴定;昆虫病毒分子生物学;昆虫病毒生物防治技术等研究领域得到很大的发展,取得长足进步,并在国际上产生重要影响.     

聚乳酸纳米粒穿透血脑屏障的分析电镜研究

观察以聚乳酸 (D ,L-polylacticacid,PLA)为材料制备、经吐温-80(T-80)表面改性的纳米粒对血脑屏障的穿透效果并探讨其机制 ,分别将FITC-Dextran、叶绿素铜作为PLA纳米粒的示踪标记 ,应用荧光显微镜、透射电镜及分析电镜观察经静脉注射入小鼠体内的PLA纳米粒在脑组织中的分布、穿透血脑屏障的特性。荧光显微镜观察到小鼠脑组织中散在及沿毛细血管壁分布的荧光颗粒 ,透射电镜可观察到小鼠脑毛细血管内皮细胞及周围脑组织中圆形或类圆形的外源性纳米粒 ;进一步采用分析电镜对颗粒处组织进行能谱分析证实其为叶绿素铜标记的PLA纳米粒。证实了T-80修饰的PLA纳米粒具有穿透血脑屏障的特性 ,机制可能是毛细血管内皮细胞的胞吞转运作用 ,同时 ,为研究纳米粒在组织内的定位提供了新的标记方法.     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体20kb DNA中cry1Ac基因的克隆、高效表达和生物活性研究

已经证实苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)伴孢晶体结合 2 0kbDNA ,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明。研究了选择性溶解Bt 4.0718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体 ,从中抽提出与其结合的 20kbDNA。经NdeⅠ酶切消化后亚克隆构建文库 ,通过PCR-RFLP及测序筛选出含cry1Ac基因的转化子。然后设计引物PCR扩增出cry1Ac基因的ORF并与pET30a连接 ,转化E .coliBL21(DE3) ,高效表达了14.1kD蛋白。表达蛋白占总蛋白量的50%以上 ,且 90 %以上以包涵体形式存在。利用穿梭载体pHT30.4构建表达质粒pHTX42 ,电转化Bt无晶体突变株XBU001,获得重组菌株HTX42 ,经SDS-PAGE分析 ,cry1Ac基因得到强表达 ,蛋白质定量分析显示目的蛋白量占总蛋白量的79.28% ,且其在细胞中累积达细胞干重的6.413% ,比文献报道的25%左右高了 1倍以上。原子力显微镜 (AtomicForceMicroscopy ,AFM)检测显示 ,目的基因在大肠杆菌(E.coli)中表达的包涵体呈不规则形状且较小,而在无晶体突变株中表达的晶体呈典型菱形晶体,大小约为1.2μm×2.0μm.生测结果显示,包涵体与晶体对小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫均有高效杀虫活性。本研究为构建高效杀虫工程菌及进一步阐明Bt伴孢晶体中20kb DNA分子的来源,结构和功能奠定了重要的基础。     

烟曲霉几丁质酶基因的克隆与表达

Chi4 4是烟曲霉 (Aspergillusfumigatus)YJ-407产生的一种胞外几丁质酶。通过用真菌几丁质酶保守氨基酸序列与Chi44的N-端序列检索烟曲霉部分基因组序列数据库 ,获得一个编号为contig555的烟曲霉基因组序列 ,可能包含烟曲霉几丁质酶的基因。根据检索结果用RT-PCR方法从烟曲霉YJ-407中克隆到1.4kb的cDNA片段 ,该cDNA的ORF编码一个395个氨基酸的蛋白 ,分子量为43.6kD。对其推导氨基酸序列分析表明该蛋白与其它真菌来源的几丁质酶同源 ,而且活性中心与人巨噬细胞几丁质酶高度同源。该cDNA已在E .coli与PichiapastorisGS115中获得表达 ,分别获得 43kD和44kD的重组蛋白 ,两种重组蛋白均有几丁质酶活性。与野生酶相比 ,大肠杆菌表达的43kD重组酶及Pichia酵母表达的44kD重组酶稳定性下降 ,说明Chi44的糖基化修饰可稳定酶蛋白.     

神经病靶标酯酶的特性

神经病靶标酯酶(NTE)是在研究有机磷引起的迟发性神经病的过程中被发现的。研究表明,NTE是一种主要存在于神经元内质网上的跨膜蛋白,其本质是具有磷脂酶B催化功能的磷脂酶,在细胞内调节磷脂酰胆碱的代谢。NTE是哺乳动物胚胎发育所必需的蛋白质,脑特异性缺失NTE会导致神经退行性症状的出现。NTE作为有机磷的作用位点,在不同的生物中可能通过不同的机制引发不同的毒性症状。     

钾元素不同供应水平下玉米叶片的生长与发育

采用沙培法,以玉米品种V1和V2为试验材料,定量分析缺钾对玉米生长和发育的影响.从胚芽鞘叶完全展开时,设置营养液中钾的浓度为3个梯度,分别为KH＝8 mmol·L-1;KM＝4 mmol·L-1;KO＝0 mmol·L-1.从胚芽鞘叶完全展开到吐丝期经常浇这3种营养液.用有效积温来计算玉米生长期间所需热量,把每日完好的叶面积作为玉米生长的衡量指标;每天记录每株玉米的叶片数,不管叶片的大小,作为衡量植株生长发育的方法.在每一个钾元素供应水平上,品种V1和V2的叶片数和自播种以来的受热时间呈直线相关.在KO水平上,V1和V2的发育速率分别是10%和15%,相对于KH水平来说是低的.在11片叶子期间,KO水平上的叶面积大约比KH水平上的低46%,KM水平上的叶面积大约比KH水平上的低25%;在玉米抽雄期,KO水平上的叶面积相对于KH来说减少37%,比KM水平上的少26%.这种差异从抽穗期开始一直保持到吐丝期.     

蛇咬伤后股脉管阻留和腔隙综合征

一位 1 5岁因被蛇咬伤踝部的病人出现了肿胀 ,肿胀扩展到胸壁 ,并出现明显的止血异常 ,腔隙综合征和股脉管阻留综合征都出现了。腔隙综合征易酷似于没有腔隙综合征的蛇咬伤。由测定腔隙内压力、舒张压或平均动脉血压力的趋向所导出的方程用来决定进行筋膜切开术时的所需 ,可不考虑区域性的静脉压或动脉压。一旦低血容量症和凝血病已经控制 ,那么 ,由蛇咬伤所致的合并脉管内阻留和腔隙综合征就有充分理由进行紧急的外科手术蛇咬伤后股脉管阻留和腔隙综合征@宾萍     

应用气升式反应器培养草酸青霉菌菌丝球的研究

应用0.5L气升式反应器成功实现了对高效染料吸附丝状真菌——草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)的颗粒化,初步解决了菌体与培养液分离的问题。以OD600为0.23的孢子悬浊液接种时,菌丝成球的最佳接种量为2.5%,最佳通气量为0.5L/min。菌球直径及沉降速度随时间均呈线性增长。在最佳接种量（2.5%）和最佳通气量（0.5L/min）下,30℃培养72h后,菌球的直径和沉降速度分别为(4.0±0.8)mm和(14±3)mm/s。     

高羊茅和其他羊茅植株再生与遗传转化研究进展

高羊茅、紫羊茅和草地羊茅均为很重要的多年生冷季型牧草与草坪草,生物技术在其品种改良中具有很大的应用潜力。30年来,三种羊茅的组织培养、胚性培养物的长期保存以及遗传转化等研究取得了较大进展,已建立起多种植株再生体系和遗传转化技术,但作为单子叶植物,这些草种的组织培养和转基因遗传改良也还存在一些问题。本文就以上几方面的内容进行了综述。     

金黄色葡萄球菌疫苗

金黄色葡萄球菌是一种重要的细菌性病原体,能引起人类各种各样的感染。由该微生物引起的浅表感染包括脓疱病,蜂窝组织炎和滤泡炎,更进一步侵入深层的葡萄球菌感染包括骨髓炎、肺炎、败血症和心内膜炎。金黄色葡萄球菌感染经常是医源性的。但社区感染的报道与日俱增。由于抗生素耐受菌株包括最新鉴定的对糖肽类抗生素敏感性减弱的分离株的出现,